mdexp:design2018_02_cell_双染色法鉴定细胞存活率

实验意义:

细胞存活率检测是指利用各种理化手段,鉴定细胞活性,区分出活/死细胞的一种检测手段。目前,细胞存活率检测在环境监测、药物检测、疾病诊断等领域,有着非常广泛的应用。本实验中,我们将学习利用双染色结合荧光成像的方法,来鉴别莱茵衣藻的活/死细胞。

实验课时:

8 课时,本实验可以分开2组做,2个人一组。所以可以有4个人来选做。

实验原理:

利用Evans Blue和Fluorescein Diacetate (FDA)两种染料,对活/死细胞不同的染色机理与效果,区分出体系中的活/死细胞。当细胞死亡时,细胞膜的通透性会发生变化,使得染料Evans Blue得以进入死细胞中; 与此同时,有活性的细胞因有外排功能而无法被Evans Blue染色。

Figure 1 The absorbance and fluorescence emission spectrum of FDA

FDA的中文名为二乙酸荧光素,是一种具有细胞膜渗透性的酯酶底物,需要在酯酶的催化下才能活化产生绿色荧光。只有活细胞才具有酯酶活性,因此,当FDA渗透进细胞之后,只有活细胞在被激发后,才能发出绿色荧光。

实验材料:

莱茵衣藻细胞、Evans Blue、Fluorescein Diacetate (FDA)、荧光显微镜 等。

实验内容

  1. 莱茵衣藻细胞培养
  2. 细胞染色操作
  3. 荧光扫描显微镜的使用
  4. 数据处理:活/死细胞的统计

实验讨论:

  1. 除了实验提及的两种染料可以区分活/死细胞之外,请查找资料,找出还有哪些别种染料可以达到同样的目的?它们的原理和优缺点分别是什么?
  2. 除了双染色荧光成像的方法外,还有哪些方法可以鉴定细胞的存活率?它们的优点和局限分别在哪里?
  3. 总结并讨论该实验的难点与优势。
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  • 最后更改: 2018/10/31 16:15
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